بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rpr) ویروس hiv با روش topo-cloning در باکتری bl۲۱ e.coli
نویسندگان
چکیده
سابقه و هدف : پروتئاز hiv نقش مهمی در بلوغ ویروس و تحریک پاسخ ایمنی میزبان دارد. به همین دلیل میتواند هم به عنوان یک هدف درمانی و هم در تست های تشخیصی کاربرد داشته باشد. در مطالعات قبلی، تولید rpr با مشکلاتی مثل سمیت، آبگریز بودن و تخلیص روبرو بوده است. هدف از این مطالعه، استفاده از سیستم بیانی pet102/d.topo برای غلبه بر مشکلات اشاره شده بود. مواد و روش ها: پس از جداسازی ژن پروتئاز از ژنوم hiv، فرایند کلونینگ با استفاده از سیستم topo cloning در وکتور بیانی pet102/d.topo انجام شد. بعد از القای بیان ژن با iptg، پروتئین تولید شده با استفاده از روش کروماتوگرافی حاوی ستون ni-nta تخلیص شد و غلظت آن با استفاده از کیت بررسی پروتئین bca سنجیده شد. تولید پروتئین نوترکیب با sds-page و وسترن بلاتینگ بررسی شد. یافته ها : کلونینگ ژن پروتئازhiv-1 با استفاده از سیستم کلونینگ topo در وکتور بیانی pet102/d بوسیله pcr با موفقیت صورت گرفت و با sequencing تایید شد. غلظت rpr پس از تخلیص بین 60 تا 85 میکروگرم در میلی لیتر بود. بیان و تولید rpr به شکل محلول، با موفقیت انجام شد. و با sds-page و وسترن بلات تایید شد. بحث و نتیجه گیری : در سیستم کلون سازی مورد استفاده به دلیل بیان rpr به صورت فیوز شده با تیوردوکسین و دارای برچسپهای هیستیدینی، مشکل سمیت،آبگریز بودن و تخلیص تا حد زیادی برطرف شد. با توجه به میزان rpr تولید شده، میتوان از آن در تست های تشخیصی و جهت بررسی و طراحی مهارکننده های پروتئاز در مطالعات بعدی استفاده کرد.
منابع مشابه
بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL21 E.coli
سابقه و هدف : پروتئاز HIV نقش مهمی در بلوغ ویروس و تحریک پاسخ ایمنی میزبان دارد. به همین دلیل میتواند هم به عنوان یک هدف درمانی و هم در تست های تشخیصی کاربرد داشته باشد. در مطالعات قبلی، تولید rPR با مشکلاتی مثل سمیت، آبگریز بودن و تخلیص روبرو بوده است. هدف از این مطالعه، استفاده از سیستم بیانی pET102/D.TOPO برای غلبه بر مشکلات اشاره شده بود. مواد و روش ها: پس از جداسازی ژن پروتئاز از ژنوم HIV...
متن کاملکلونینگ و بیان پروتئین m۲ ویروس آنفلوانزا h۱n۱ در باکتری ecoli سویه bl۲۱(de۳)
سابقه و هدف: ویروس انفلوانزا a یکی از عوامل اصلی مرگ ومیر سالیانه می باشد و از سال 1960 میلادی بر علیه آن واکسن موثر در دسترس بوده است. تغییرات مداوم آنتی ژنیک ویروس چالش بزرگی در مسیر تولید سالیانه واکسن می باشد. در حال حاضر محققین روی آنتی ژنهای ثابت ویروس مطالعه می کنند. پروتئینm2 یک کانال یونی درون پوشش ویروس انفلوانزای a تشکیل می دهد که در عفونت زایی آن موثر است. این پروتئین حفاظت شده است ...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی
زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...
متن کاملبهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا
زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته اس...
متن کاملکلونینگ و بیان پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا H1N1 در باکتری Ecoli سویه BL21(DE3)
سابقه و هدف: ویروس انفلوانزا A یکی از عوامل اصلی مرگ ومیر سالیانه می باشد و از سال 1960 میلادی بر علیه آن واکسن موثر در دسترس بوده است. تغییرات مداوم آنتی ژنیک ویروس چالش بزرگی در مسیر تولید سالیانه واکسن می باشد. در حال حاضر محققین روی آنتی ژنهای ثابت ویروس مطالعه می کنند. پروتئینM2 یک کانال یونی درون پوشش ویروس انفلوانزای A تشکیل می دهد که در عفونت زایی آن موثر است. این پروتئین حفاظت شده ا...
متن کاملکلونسازی، بیان و تخلیص پروتئین اینتگراز ویروس HIV و بررسی آنتی‌ژنیسیته آن
Background: Improving the performance of HIV diagnosis assays is one of the most important ways to reduce HIV transmission. Because of the high mutation rate of HIV, it is critical to use the conserved proteins to develop diagnostic immunoassay methods. Because integrase is one of the most conserved proteins of HIV, it may be a good target for this purpose. In this paper cloning, purification a...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیجلد ۶، شماره ۲۱، صفحات ۲۱-۲۸
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023